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细胞克隆形成实验
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细胞克隆形成实验

  克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术,其原理是将细胞分离成单细胞悬液,在培养基上接种培养,根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。该实验可用来研究月中瘤细胞的增殖能力、侵袭性,探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。  根据培养基是否需要软琼脂,克隆形成实验可以分为平板克隆形成实验(PCF)和软...

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  克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术,其原理是将细胞分离成单细胞悬液,在培养基上接种培养,根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。该实验可用来研究月中瘤细胞的增殖能力、侵袭性,探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。

  根据培养基是否需要软琼脂,克隆形成实验可以分为平板克隆形成实验(PCF)和软琼脂克隆形成实验(SACF)。PCF是直接将细胞接种于培养瓶、培养皿中,优点为操作简便、细胞间分泌的促生长因子可在培养液中扩散、克隆形成率高,适用于贴壁生长的细胞;缺点为细胞在 贴壁前易于移动。SACF 是采用半固体培养基模拟体内生长环境,适用于悬浮细胞及不依赖于贴壁生长的月中瘤细胞。在悬浮状态下不能增殖的细胞(如正常成纤维细胞)不适用此法。

  实验步骤

  1. 实验处理:根据实验需求对细胞进行特殊处理,如加药、辐照等;

  2. 制备单细胞悬液:取对数生长期的细胞,用细胞解离试剂把细胞消化并吹成单细胞,收集细胞,用适当培养基重悬细胞,制成单细胞悬液;

  3. 种板:对细胞进行计数,并根据实验需要稀释,接种到合适的培养容器中;

  4. 培养:将细胞放进培养箱培养1-3周,当每个克隆增殖至约50个细胞(肉眼可见克隆),终止培养;

  5. 固定:吸去培养基,PBS洗涤后加入固定液,室温孵育15-30 min;

  6. 染色:吸去固定液,加入染色液,室温孵育30-60 min;

  7. 克隆计数:用水小心洗去染色液,对克隆进行计数;

  8. 结果分析:克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%

  实验结果展示:

细胞克隆形成实验(图1)

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