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细胞划痕实验
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细胞划痕实验

  服务介绍:  细胞划痕实验(Wound-Healing Assay)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。“划痕”边缘的细胞会逐渐进入空白区域...

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  服务介绍:

  细胞划痕实验(Wound-Healing Assay)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。“划痕”边缘的细胞会逐渐进入空白区域,并将重新进入细胞周期,增殖直到“划痕”愈合。因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound-Healing Assay),广泛用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移和修复的影响。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

  实验步骤:

  1. 培养板划线标记:用marker笔在6孔板背后画横线(用直尺比着),每孔至少穿过5条线,每条线均匀且平行。

  2. 细胞铺板:在孔内接种约5-10×105个细胞(可根据细胞的生长快慢调整接种数量),原则为过夜后细胞能够长满,切记一定要铺匀。

  3. 细胞划线:第二天用200 uL无菌枪头,垂直孔板背后的黑线划痕,使划痕与标记线相交。

  附:减少划痕距离的误差办法——

  ●不同孔之间使用同一只枪头或牙签;

  ●枪头要垂直,不能倾斜,划痕时可比着直尺;

  ●保持力度一致,尽量一次性划完。

  4. 清洗:PBS洗细胞,去除划下的细胞

  5. 细胞培养与观察:将细胞放入37℃,5%CO2培养箱中培养。然后在适当的时间点,如0、6、12、24 h后取出细胞板,在显微镜下观察并拍照。

  6. 数据分析:使用 Image J软件打开图片后,随机划取6至8条水平线,计算细胞间距离的均值。

  实验结果展示:

细胞划痕实验(图1)细胞划痕实验(图2)

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