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膜蛋白酵母双杂交文库构建

可介导蛋白降解的泛素ubiquitin被分为:①Cub(C端结构域)②Nub(N端结构域):第三位的I被突变为G得到NubG,NubG在bait和prey互作下结构重构,与Cub发生互作。原理: Cub与LexA-VP16转录激活因子连接成Cub-LexA-VP16,当bait-Cub-LexA-VP16与prey-NubG可互作时,Cub与NubG在空间上接近发生重构,被UBPs识别,LexA-VP16被解离进入核内,使启动子下游基因(抗性筛选、蓝白斑筛选、营养缺陷型筛选等)得到转录。

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服务优势

  • SMART方法与同源重组技术结合构建文库,利用酵母菌株的特点构建文库
  • AbA抗性筛选有效抑制背景生长,大大降低假阳性率
  • 文库构建菌株为α型Y187,可简便与a型菌株Y2H Gold结合生长筛选
  • 样本需求量低:相比invitrogen而言,大大降低了样本的需求量,尤其对珍贵样本
  • 样本中低丰度mRNA损失量低:相比invitrogen,无需转化到大肠杆菌进行文库保存,直接转化酵母菌株
  • invitrogen的Gateway重组技术虽然可简便转换到其他载体,但Clontech次生文库也可通过增加cDNA样本备份达到同样的目的
  • Invitrogen文库构建费用更高
 

服务流程

  • 1.膜蛋白酵母双杂交文库构建项目评估
  • 2.建库
  • 3.文库验证
  • 4.文库筛选
 

服务案例

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