磷酸化抗体制备
翻译后修饰对蛋白质生物学功能至关重要,在生命现象的许多关键调节机制中发挥重要作用,其中蛋白质的磷酸化是最常见的重要翻译后修饰之一,它参与了体内几乎所有的细胞活动,与信号传导,细胞周期,增殖代谢,生长发育等诸多生物学问题有密切关系。磷酸化通常是在激酶作用下向蛋白质添加磷酸(PO4)基团,最常见的是在丝氨酸(S),苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)残基上。由于磷酸化蛋白质可以发挥复杂的作用,在细胞水平上准确和精确地定量磷酸化蛋白质对于破译和了解细胞功能至关重要。
针对一个底物磷酸化和去磷酸化状态下的磷酸化位点而生产的抗体,这样利用底物磷酸化和去磷酸化时和抗体结合型的改变来研究底物是否被磷酸化,从而研究蛋白活性的变化。免疫原经过磷酸化,用其制备的抗体就称之为磷酸化抗体。
磷酸化抗体应用
蛋白磷酸化水平往往和蛋白活性相关,很多信号通路蛋白在受到某些刺激后都是通过改变其磷酸化水平而引起细胞的一系列反应,但其蛋白含量不见得会有多大的变化。
磷酸化抗体,针对特定磷酸化位点制备,检测该蛋白在细胞受到刺激时蛋白质的功能状态的变化(磷酸化水平增强或减弱)。
非磷酸化抗体,主要检测组织或细胞中该蛋白表达情况,组织分布或细胞定位,同时可作为磷酸化水平变化的内参。
磷酸化多克隆抗体制备服务
服务阶段 | 服务内容 | 交付产品 |
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阶段一:设计合成磷酸化多肽 | 合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽 | .2~3mg多肽(非磷酸化多肽和磷酸化多肽) . 1~2ml免疫前血清 .2~5mg磷酸化抗体 . ELISA检测结果 .项目报告 |
阶段二:多肽偶联 | 合成多肽与载体蛋白偶联(KLH,BSA) | |
阶段三:抗血清制备 | 免疫前采血,免疫四次并采集血清 | |
阶段四:小规模纯化 | 血清小样采集和检测 | |
阶段五:抗原亲和纯化 | 制备磷酸化亲和纯化柱,非磷酸化多肽亲和柱去除交叉反应 | |
阶段六:检测 | ELISA检测效价 |
磷酸化单克隆抗体制备服务
服务阶段 | 服务内容 | 交付产品 |
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阶段一:设计合成磷酸化多肽 | 合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽 | .5mg修饰多肽、3mg未修饰多肽和抗体产品 .50ul免疫前血清 .2-5株杂交瘤细胞 .3-8mg纯化抗体(2株杂交瘤)ELISA检测结果 .亚型鉴定结果 .完整项目报告 |
阶段二:多肽偶联 | 合成多肽与载体蛋白偶联(KLH,BSA) | |
阶段三:免疫与检测 | 免疫前采血,免疫四次并采集血清 免疫并用磷酸化和非磷酸化多肽进行ELISA检测 | |
阶段四:细胞融合 | 磷酸化多肽显示出的最佳免疫的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合 | |
阶段五:增殖与筛选 | ELISA检测出阳性克隆并进行亚克 | |
阶段六:腹水制备及纯化 | 腹水制备,Protein G纯化 | |
阶段七:检测 | ELISA检测效价 |