细胞克隆形成实验

克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术，其原理是将细胞分离成单细胞悬液，在培养基上接种培养，根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。该实验可用来研究月中瘤细胞的增殖能力、侵袭性，探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。

　　根据培养基是否需要软琼脂，克隆形成实验可以分为平板克隆形成实验(PCF)和软琼脂克隆形成实验(SACF)。PCF是直接将细胞接种于培养瓶、培养皿中，优点为操作简便、细胞间分泌的促生长因子可在培养液中扩散、克隆形成率高，适用于贴壁生长的细胞;缺点为细胞在 贴壁前易于移动。SACF 是采用半固体培养基模拟体内生长环境，适用于悬浮细胞及不依赖于贴壁生长的月中瘤细胞。在悬浮状态下不能增殖的细胞(如正常成纤维细胞)不适用此法。

　　实验步骤：

　　1. 实验处理：根据实验需求对细胞进行特殊处理，如加药、辐照等;

　　2. 制备单细胞悬液：取对数生长期的细胞，用细胞解离试剂把细胞消化并吹成单细胞，收集细胞，用适当培养基重悬细胞，制成单细胞悬液;

　　3. 种板：对细胞进行计数，并根据实验需要稀释，接种到合适的培养容器中;

　　4. 培养：将细胞放进培养箱培养1-3周，当每个克隆增殖至约50个细胞(肉眼可见克隆)，终止培养;

　　5. 固定：吸去培养基，PBS洗涤后加入固定液，室温孵育15-30 min;

　　6. 染色：吸去固定液，加入染色液，室温孵育30-60 min;

　　7. 克隆计数：用水小心洗去染色液，对克隆进行计数;

　　8. 结果分析：克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%

　　实验结果展示：