稳转细胞株筛选

实验原理

哺乳动物稳定细胞系（stable cell line）是指使用外源目的基因整合到染色体上的稳定表达的细胞，通过外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代，可以稳定表达目的基因的细胞系（cell line）。

相对于瞬时转染来说，稳转转染细胞是将携带了目的基因、组成型启动子、抗性基因、筛选标记、表达增强子等一系列元件的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的蛋白。建立稳定的细胞系，是指对靶细胞进行筛选，根据不同表达载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，或者是利用基因缺陷的原理进行筛选，最终获得稳定传代的细胞株。

稳转细胞系分类

混合克隆稳转细胞系：慢病毒转染后通过药物筛选得到表达抗性基因的混合克隆，不同克隆的目的基因整合位置和表达量不同。混合克隆细胞系筛选相对容易，花费时间少。在目的细胞转染效率高，目的基因表达效率高的情况下，多克隆细胞系是理想的选择。

单克隆稳转细胞株：进行药物筛选，再利用有限稀释法等方法获得单个细胞，将单个细胞扩增获得单克隆细胞系；单克隆细胞株基因整合位置和表达量均是一致的。目的细胞难以感染、目的基因表达率低、或用于蛋白/抗体生产时，常选择单克隆稳转细胞系。

常用的抗性筛选标志物

新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin) 、杀稻瘟菌素S （Blasticidin S）等

实验流程

1.构建载体：选择合适的慢病毒表达载体，将目的基因整合到载体上

2.慢病毒包装：将慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒瞬时转染到293T细胞中，培养48~72小时，收集病毒上清，并浓缩纯化，检测滴度

3.细胞前处理：对目的细胞进行实验处理，设置好阴性、阳性对照

4.病毒感染：将包装好的慢病毒与目的细胞共孵育

5.筛选抗性细胞：通过药物筛选出表达抗性基因的细胞

6.扩大培养鉴定：将筛选出来的细胞克隆扩大培养，通过RT-qPCR、WB等方法鉴定目的基因表达情况

百齐生物可在任何细胞的基因组上插入您感兴趣的基因，并筛选稳定整合的单克隆细胞株。其可应用于多种研究领域，如信号传导，药物靶点研究，免疫治疗药物开发等。百齐生物已经在数十种细胞中成功构建细胞系。您只需提供基因序列，我们按照要求完成细胞株的筛选。

服务提示

1. 如客户提供细胞系，请参考《细胞寄送注意事项》。

2. 需客户告知目的基因具体信息，确定稳转细胞系的类型（多克隆/单克隆）。

3. 百齐生物提供标准实验流程报告、相关的实验图片、实验数据、构建完成的稳转细胞系。

4. 如果您有任何疑问和服务要求，可以点击右侧 在线咨询 联系我们，或者直接拨打15623300811，我们专业的技术人员会第一时间答复您。