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膜蛋白酵母双杂交文库构建
在酵母细胞中,泛素可以分成两部分表达,即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub),后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白([NubI:Cub]-reporter)体系。Cub与LexA-VP16转录激活因子连接成Cub-LexA-VP16,当bait-Cub-LexA-VP16与prey-NubG可互作时,Cub与NubG在空间上接近发生重构,被UBPs识别,LexA-VP16被解离进入核内,使启动子下游基因(抗性筛选、蓝白斑筛选、营养缺陷型筛选等)得到转录。
服务类型 | 实验内容 | 交付内容 | 周期 |
文库构建 | 1.提取样本总RNA; 2.scDNA合成与扩增; 3.将dscDNA连接到pPR3载体上; 4.将连接好文库载体电转化DH10B宿主; 5.收集文库及文库质量检测 | 滴度在于1×10^7以上的大肠杆菌文库菌液; 质粒浓度在2-5ug/ul,提供50ug纯化质粒。 文库PCR鉴定结果图片。 | 2个月 |
文库筛选 | 将Bait-PBT3载体转化到NMY51宿主细胞获得Bait-PBT3 NMY51细胞; 将文库质粒共转化到Bait-PBT3 – NMY51细胞; 摸索试用适当的筛选压力进行文库筛选并测序。 | 1-2个月 |